Programma di preparazione del campione di DNA residuo della cellula ospite
May 21, 2021
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I farmaci proteici ricombinanti, i farmaci anticorpali, i vaccini e altri prodotti nei prodotti biologici sono espressi e prodotti da linee cellulari continue. Sebbene siano stati sottoposti a rigorosi processi di purificazione, potrebbero esserci ancora frammenti residui di DNA della cellula ospite (rDNA) nei prodotti.
Questi rDNA possono influenzare la funzione dei geni chiave del recettore, portando così il rischio di infettività o tumorigenicità.
Pertanto, è particolarmente importante come ottenere in modo efficiente e stabile l'rDNA in traccia nel campione. Attualmente, ci sono principalmente i seguenti metodi:
| metodi | Vantaggio | Svantaggio |
| Fenolo/cloroformio | Elevata purezza del DNA e alto contenuto | Passi dispendiosi in termini di tempo, ingombranti e tossici |
| Precipitazione di ioduro di sodio | facile da usare | Contenuto di DNA instabile e dispendioso in termini di tempo |
| Metodo della colonna | Semplice e di elevata purezza | Richiede tempo e difficile da automatizzare |
| Metodo con perline magnetiche | Semplice, di elevata purezza, può essere automatizzato | - |
![NP-2032[1]](/Content/uploads/2021213197/20210522104030d04d958e72634ed5a62eff19fd61da6f.png "NP-2032[1]") |
Questo schema di trattamento si basa sul principio del metodo delle sfere magnetiche e viene utilizzato nel sistema di pretrattamento rDNA di prodotti biologici, che può realizzare un sistema di pretrattamento efficiente, semplice e automatizzato.
Lo strumento di estrazione automatica dell'acido nucleico SCIENTZ è dotato di un noto marchio di kit di pretrattamento del campione di DNA residuo della cellula ospite (metodo con perline magnetiche) e il tasso di recupero di vari campioni è stabile fino a oltre l'80%, che può controllare in modo stabile ed efficace il contenuto residuo di DNA della cellula ospite in vari prodotti biologici
Programma sperimentale
Materiali sperimentali: strumento per l'estrazione automatica dell'acido nucleico (NP-2032), strumento per PCR quantitativa fluorescente (LightCycler480), kit di pretrattamento del campione di DNA residuo della cellula ospite (metodo con biglie magnetiche), kit di rilevamento del numero di copie del gene CAR/TCR (metodo multiplex PCR- Fluorescenza con sonda). )
Campioni sperimentali: campioni di retrovirus, campioni di cellule CAR-T, controllo negativo
Passi sperimentali:
Per il monitoraggio.
Preparazione dell'esperimento-preparazione del campione-preparazione dell'estrazione-avvio del programma-rilevamento del contenuto residuo totale
Note: lo strumento funziona per circa 30 minuti
Risultati sperimentali:
| Nome del campione | MediaCp | MediaConc | Importo recuperato | Scalare | Tasso di recupero |
| Controllo negativo | 36.43 | 0.00 | - | - | - |
| Controllo negativo+(portatile) | 18.67 | 86.62 | 8662.15 | 9707.85 | 89% |
| Controllo negativo | 18.72 | 53.47 | 8020.723657 | 9868.821045 | 81% |
| Campione di virus+ | 19.15 | 63.10 | 8194.27 | 9707.85 | 84% |
| Campione cellulare | 20.21 | 32.93 | 2811.241943 | 2740.516576 | 102% |
Risultati sperimentali:
L'elaborazione automatizzata di diversi campioni ha risultati stabili ed efficienti;
L'efficienza dell'automazione dell'elaborazione batch è superiore all'efficienza dell'estrazione manuale;
Soddisfa i requisiti del nuovo tasso di recupero USP; può essere un buon assistente per la pre-elaborazione del rilevamento dell'rDNA nei prodotti biologici.
Esposizione del prodotto:
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