Programma di preparazione del campione di DNA residuo della cellula ospite
May 21, 2021
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Farmaci proteici ricombinanti, farmaci anticorpali, vaccini e altri prodotti nei prodotti biologici sono espressi e prodotti da linee cellulari continue. Sebbene siano stati sottoposti a rigorosi processi di purificazione, potrebbero essere ancora presenti frammenti residui di DNA di cellule ospiti (rDNA) nei prodotti.
Questi rDNA possono influenzare la funzione dei geni chiave del recettore, portando così il rischio di infettiva o tumorigenicità.
Pertanto, come ottenere in modo efficiente e stabile la traccia di rDNA nel campione è particolarmente importante. Al momento, ci sono principalmente i seguenti metodi:
| Metodi | Vantaggio | Svantaggio |
| Fenolo / Cloroformio | Elevata purezza del DNA e alto contenuto | Passaggi lunghi, ingombranti e tossici |
| Precipitazione con ioduro di sodio | facile da usare | Contenuto di DNA instabile e dispendioso in termini di tempo |
| Metodo della colonna | Semplice e di elevata purezza | Richiede tempo e difficile da automatizzare |
| Metodo con perline magnetiche | Semplice, di elevata purezza, può essere automatizzato | - |
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Questo schema di trattamento si basa sul principio del metodo del tallone magnetico ed è utilizzato nel sistema di pretrattamento rDNA di prodotti biologici, che può realizzare un sistema di pretrattamento efficiente, semplice e automatizzato.
Lo strumento per l'estrazione automatica degli acidi nucleici SCIENTZ è dotato di un noto marchio di kit di pretrattamento del campione di DNA residuo di cellule ospiti (metodo a biglie magnetiche) e il tasso di recupero di vari campioni è stabile fino a oltre l'80%, il che può controllare in modo stabile ed efficace il contenuto residuo del DNA della cellula ospite in vari prodotti biologici
Programma sperimentale
Materiali sperimentali: strumento per l'estrazione automatica degli acidi nucleici (NP-2032), strumento per PCR quantitativa fluorescente (LightCycler480), kit di pretrattamento del campione di DNA residuo della cellula ospite (metodo a biglie magnetiche), kit di rilevamento del numero di copie del gene CAR / TCR (PCR multiplex- metodo della sonda di fluorescenza )
Campioni sperimentali: campioni di retrovirus, campioni di cellule CAR-T, controllo negativo
Passaggi sperimentali:
Per il monitoraggio.
Preparazione dell'esperimento-preparazione del campione-preparazione dell'estrazione-programma di avvio-rilevamento del contenuto residuo totale
Note: lo strumento funziona per circa 30 minuti
Risultati sperimentali:
| Nome del campione | MeanCp | MeanConc | Importo recuperato | Scalare | Tasso di recupero |
| Controllo negativo | 36.43 | 0.00 | - | - | - |
| Controllo negativo + (portatile) | 18.67 | 86.62 | 8662.15 | 9707.85 | 89% |
| Controllo negativo | 18.72 | 53.47 | 8020.723657 | 9868.821045 | 81% |
| Esempio di virus + | 19.15 | 63.10 | 8194.27 | 9707.85 | 84% |
| Campione di cellule | 20.21 | 32.93 | 2811.241943 | 2740.516576 | 102% |
Risultati sperimentali:
L'elaborazione automatizzata di diversi campioni ha risultati stabili ed efficienti;
L'efficienza dell'automazione dell'elaborazione in batch è superiore all'efficienza dell'estrazione manuale;
Soddisfa i requisiti del nuovo tasso di recupero USP; può essere un buon assistente per la pre-elaborazione del rilevamento di rDNA in prodotti biologici.
Esposizione del prodotto:
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